Analyysi: uusi työkalu tuberkuloosin ja ei-tuberkuloosin mykobakteerien nopeaan erottamiseen

Abstrakti

TEKSTI
Capilia TB -analyysi on nopea, yksinkertainen ja halpa tunnistustesti laajasti (1–7) arvioitujen mykobakteeriviljelyisolaattien tunnistamiseksi. Tämän määrityksen uusi sukupolvi, Capilia TB-Neo -määritys (Capilia), on kehitetty korvaamaan alkuperäinen määritys (Y. Namba, 8. syyskuuta 2010, eurooppalainen patenttihakemus EP 2226635 A1). Alkuperäisen määrityksen herkkyyden ja spesifisyyden on osoitettu vaihtelevan välillä 92% – 100% (1, 2, 6). Ristireaktio muiden mykobakteerien ja muiden bakteerien kanssa on osoitettu alkuperäisellä määrityksellä (1, 7; Y. Namba, 8. syyskuuta 2010, eurooppalainen patenttihakemus EP 2226635 A1).

Tuloksena kehitettiin uusi määritys korvaamaan alkuperäinen määritys ristireaktion hoitamiseksi ja spesifisyyden parantamiseksi (Y. Namba, 8. syyskuuta 2010, eurooppalainen patenttihakemus EP 2226635 A1). Toistaiseksi on vain kaksi julkaistua tutkimusta, jotka ovat arvioineet tätä seuraavan sukupolven määritystä, ja tutkimukset osoittavat ristiriitaisia ​​tuloksia. Gomathi et ai. Havaitsivat yleisen herkkyyden ja spesifisyyden vähenemisen. (8) – vastaavasti 76% ja 86%. Pokam et ai. raportoivat herkkyyden ja spesifisyyden lähestyvän 100%, mikä on verrattavissa alkuperäisen esseen (9) vastaavuuteen.

Tutkimus tehtiin käynnissä olevan tutkimuksen isolaateilla, joissa arvioidaan GeneXpert MTB / RIF -testin (Xpert) käyttöä Lusakassa, Sambiassa. Yskenäytteet kerättiin epäiltyistä tuberkuloosista (TB) ja vahvistetuista tuberkuloosipotilaista, jotka osallistuivat rutiinipalveluihin ja joille Xpert havaitsi tuberkuloosia tai tuberkuloosia rifampiiniresistenssillä, ja 10 prosentista niistä, joille Xpert ei havainnut tuberkuloosia, laadunvarmistamiseksi, rifampiiniresistenssin vahvistamiseksi, ja hoidon seurantatarkoituksiin. Tutkimuksella oli eettinen hyväksyntä Sambian yliopiston eettisen komitean toimesta, ja kaikki potilaat antoivat kirjallisen tietoon perustuvan suostumuksen ennen yskösnäytteiden toimittamista mykobakteeriviljelmään.

Arviointiprotokolla
Jokainen kolmesta testistä tehdään kunkin valmistajan
ohjeiden mukaisesti seuraavien määrittämiseksi.
1. Herkkyys M. tuberculosis -havaitsemiseksi MGIT-viljelmillä
a. Kukin paikka ympää 25 erilaista MTB-potilaskantaa MGIT-putkiin ja
lataa ne BACTEC MGIT 960 -laitteeseen
b. Kukin paikka testaa positiiviset viljelmät käyttämällä kolmea määritystä ensimmäisenä päivänä, jolloin
viljelmät signaalivat positiivisena
c. Lue ja kirjaa testitulokset tarkkaan ajankohtaan, joka on suositeltavaa kussakin testipakkauslehdessä
(15 min), ja lukea uudelleen 30 minuutin ja 60 minuutin kohdalla (päivä 1 ja päivä 3
klo 15, 30 ja 60 min)
d. Tallenna kaistan voimakkuus sekä testi- että vertailulinjoille (“negatiivinen” (-),
“Erittäin heikko” (+/-), “heikko” (+), “keskitaso” (++) ja “vahva” (+++).
e. Viljelmiä, joiden testitulos on negatiivinen, inkuboidaan uudelleen 36 ° C: n inkubaattorissa
vielä 48 tuntia ennen uudelleentestausta.

2. Herkkyys M. tuberculosis -havaitsemiseksi LJ-viljelmillä
a. Kukin paikka inokuloi 20 erilaista potilaskantaa MTB-kantoja LJ-alustalle
ja inkuboi 36 ° C: ssa näkyvien pesäkkeiden ilmaantumiseen.
b. Valmista jokaisen kannan suspensio, joka vastaa MacFarlandin sameusstandardia
1.0, kuhunkin testipakkaukseen sisältyvään puskuriin.
c. Valmistetaan laimennukset jokaisesta 1,0 MacFarland-standardisuspensiosta
määrityspuskurissa arvoon 1:10 ja 1: 100.
d. Testaa jokaisen MTB-kannassuspension kaikki kolme laimennosta käyttämällä kutakin
kolmea immunomääritystä
e. Lue ja kirjaa testitulokset tarkkaan ajankohtaan, joka on suositeltavaa kussakin testipakkauslehdessä
(15 min), ja lukea uudelleen 30 minuutin ja 60 minuutin kohdalla (jokaisella laimennuksella:
1,0, 1/10 ja 1/100)
f. Tallenna kaistan voimakkuus sekä testi- että kontrollilinjoille (”negatiivinen” (-),
“hyvin heikko” (+/-), “heikko” (+), “keskitaso” (++) ja “vahva” (+) ++).

Päätelmät :
• Kaikki kolme testiä osoittivat 100% herkkyyden M-tuberkuloosin havaitsemiseksi
MGIT: stä positiivisuuspäivänä.
• Kahden kiinteässä viljelmässä käytettäväksi osoitetun testin (Capilia TB NEO
ja SD TB Ag MPT64 -pikatesti) herkkyys oli 100% M. tuberculosis -bakteerin havaitsemiseksi
LJ-viljelmillä kasvatetuista isolaateista, kun ne suoritettiin pakkausselosteiden mukaisesti.
BD MGIT TBc Tunnistaminen Testi ei ole tarkoitettu käytettäväksi kiinteän mediakulttuureissa
ja näytti vähentyneen herkkyyden, kun niitä testattiin LJ-kantojen menettelyä

käytetään tässä tutkimuksessa.
• Capilia TB Neo ja BD MGIT ID -testi eivät antaneet vääriä positiivisia tuloksia
minkään testatun NTM: n kanssa (spesifisyys 100%). SD Bioline TB Ag MPT64 antoi heikot vääriä positiivisia tuloksia kahdella M. mahakannalla yhdessä neljästä tutkimuskohteesta. •
Testien toiminnalliset ominaisuudet olivat samanlaiset. Teknologit pitivät
Capilia TB Neo -määritystä helpommin luettavana johtuen testikaistan vahvemmasta kaistan voimakkuudesta
verrattuna kahteen muuhun määritykseen. SD TB Ag MPT64 -pikatesti osoitti taustatekijöitä, jotka estävät testin tulkintaa, jos se luetaan 30 minuutin kuluttua, vaikka valmistajan ohjeet sallivat sen. BD MGIT ID -testiä ei ole valmistettu käytettäväksi kiinteiden viljelmien isolaattien kanssa.

Yhteenvetona voidaan todeta, että nyt on olemassa kolme kaupallisesti tuotettua pikatestiä, jotka mahdollistavat
M. tuberculosisin erittäin herkän tunnistamisen positiivisista MGIT-viljelmistä. Kaksi näistä valmistetaan myös käytettäväksi kiinteiden viljelmien isolaattien kanssa ja niiden
suorituskyky on hyvä . Kaikki kolme määritystä osoittavat hyväksyttävän yleisen herkkyyden, spesifisyyden ja
helppokäyttöisyyden. SD-määritys osoitti enemmän taustaväriä pitkittyneillä
lukuaikoilla ja se voi reagoida ristireaktiossa M. gastrin kanssa, ja BD MGIT ID -testi osoitti jonkin verran heikompia testivyöhykkeitä, jolloin tuloksista tuli vähemmän ilmeisiä.

 

CMV-TetR (Neo) Lentiviral particles
LVP017-Neo	GenTarget	1x107 IFU/ml x 200ul	EUR 484.8
Description: Pre-made lentiviral particles expressing tetracycline regulator protein (TetR) under CMV promoter, with Neomycin antibiotic marker.

β-Lactamase (Neo) lentiviral particles
LVP335-Neo	GenTarget	1x107 IFU/ml x 200ul	EUR 418.8
Description: pre-made lentiviral particles expressing β-Lactamase gene. A Neomycin marker was expressed under RSV promoter. Particles is provided in DMEM medium with 10% FBS and 60ug/ml of polybrene.

EF1a-TetR (Neo) Lentiviral particles
LVP459-Neo	GenTarget	1x107 IFU/ml x 200ul	EUR 484.8
Description: Pre-made lentiviral particles expressing tetracycline regulator protein (TetR) under enhanced EF1a promoter with Neomycin antibioic marker.

LoxP GFP/RFP ColorSwitch (Neo) lentivirus
LVP460-Neo	GenTarget	1x107 IFU/ml x 200ul	EUR 852
Description: Pre-made lentiviral particles expressing "LoxP-GFP-stop-LoxP-RFP-Stop" cassette under suCMV promoter. It also contains a Neomycin antibiotic selection marker under Rsv promoter. Virus is provided in DMEM medium with 10% FBS and 60ug/ml of polybrene.

Rapid Bovine TB Ab Test Kit
RB23-02-DD	Bionote	1 box	EUR 154.08
Description: Please check the datasheet of Rapid Bovine TB Ab Test Kit before using the test.

pWZL-Neo Retroviral Vector
RTV-001-NEO	Cell Biolabs	10 ?g	EUR 679.2
Description: Use this construct to clone your gene for downstream recombinant retroviral packaging

SV40 large T-antigen (Neo), CMV lentiviral particles
LVP016-Neo	GenTarget	1x107 IFU/ml x 200ul	EUR 418.8
Description: Pre-made lentiviral particles expressing SV40 large T-antigen under suCMV promoter, containing Neomycin marker.

SV40 large T-antigen (Neo), EF1a lentiviral particles
LVP557-Neo	GenTarget	1x107 IFU/ml x 200ul	EUR 418.8
Description: Pre-made lentiviral particles expressing SV40 large T-antigen under EF1a promoter, containing Neomycin marker.

CMV Control lentiviral particles (Neo)
CMV-Null-Neo	GenTarget	1 x107 IFU/ml x 200ul	EUR 418.8
Description: Negative control lentivirus contains a null spacer insert under CMV promoter, serves as the negative control of lentivurs treatment for the specificity of any target expression effects. It also has the Neomycin marker under RSV promoter.

EF1a Control lentiviral particles (Neo)
EF1a-Null-Neo	GenTarget	1 x107 IFU/ml x 200ul	EUR 418.8
Description: Negative control lentivirus contains a null spacer insert under EF1a promoter, serves as the negative control of lentivurs treatment for the specificity of any target expression effects. It also has the Neomycin marker under RSV promoter.

TB (Mycobacterium Tuberculosis Antibody IgM) ELISA test
39	Biobase	96T/Box	Ask for price
Description: ELISA based test for quantitative detection of TB (Mycobacterium Tuberculosis Antibody IgM)

TB (Mycobacterium Tuberculosis Antibody IgG) ELISA test
38	Biobase	96T/Box	Ask for price
Description: ELISA based test for quantitative detection of TB (Mycobacterium Tuberculosis Antibody IgG)

Ag Rapid Bov. TB Ab Test Kit
RB23-02	Bionote	1 box	EUR 174
Description: Please check the datasheet of Ag Rapid Bov. TB Ab Test Kit before using the test.

hTERT (CMV, Neo) lentivirus in PBS
LVP1130-Neo-PBS	GenTarget	1x108 IFU/ml x 200ul	EUR 852
Description: Concentrated lentivirus in PBS, expressing human TERT gene under suCMV promoter, containing Neomycin marker.

hTERT (EF1a, Neo) lentivirus in PBS
LVP1131-Neo-PBS	GenTarget	1x108 IFU/ml x 200ul	EUR 852
Description: Concentrated lentivirus in PBS, expressing human TERT gene under EF1a promoter, containing Neomycin marker.

rtTA (Neo) in PBS, Lentiviral particles
LVP400-Neo-PBS	GenTarget	5x107 IFU/ml x 200ul	EUR 608.4
Description: Pre-made lentiviral particles expressing reverse tetracycline Transcriptional Activator (rtTA) under enhanced EF1a promoter with Neomycin antibioic marker, concentrated particles provided in PBS solution.

Color Switch, CRE report cell line: HEK293-loxP-GFP-RFP Neo)
SC018-Neo	GenTarget	2x10E6 cell/ml x1ml	EUR 5280
Description: CRE reporter cell line (Neo): HEK293 cell line expressing "LoxP-GFP-stop-LoxP-RFP" cassette with Neomycin antibiotic marker

CMV-TetR (Neo) Lentiviral particles  in PBS
LVP017-Neo-PBS	GenTarget	5x107 IFU/ml x 200ul	EUR 608.4
Description: Pre-made lentiviral particles expressing tetracycline regulator protein (TetR) under CMV promoter, with Neomycin antibiotic marker. Particles pellet was re-suspended in PBS solution.

EF1a-TetR (Neo) Lentiviral particles  in PBS
LVP459-Neo-PBS	GenTarget	5x107 IFU/ml x 200ul	EUR 608.4
Description: Pre-made lentiviral particles expressing tetracycline regulator protein (TetR) under enhanced EF1a promoter with Neomycin antibioic marker. Particles was pellet down and re-suspended in PBS solution.

LoxP GFP/RFP ColorSwitch (Neo) lentivirus (concentrated)
LVP460-Neo-PBS	GenTarget	5x107 IFU/ml x 200ul	EUR 1034.4
Description: Pre-made lentiviral particles expressing "LoxP-GFP-stop-LoxP-RFP-Stop" cassette under suCMV promoter. It also contains a Neomycin antibiotic selection marker under Rsv promoter. Virus was provied in PBS solution.

NATtrol Zika Virus Stock (Qualitative) (1 mL)
TEST	Zeptometrix	1 mL	EUR 1327.97
Description: Please contact Gentaur in order to receive the datasheet of the product.

TB-16&TB-38
E61H01302	EnoGene	100ug	EUR 411.6

SV40 large T-antigen (Neo) in PBS, CMV lentiviral particles
LVP016-Neo-PBS	GenTarget	5x107 IFU/ml x 200ul	EUR 852
Description: Pre-made lentiviral particles expressing SV40 large T-antigen under suCMV promoter, containing Neomycin marker, provided in PBS solution.

SV40 large T-antigen (Neo) in PBS, EF1a lentiviral particles
LVP557-Neo-PBS	GenTarget	5x107 IFU/ml x 200ul	EUR 852
Description: Pre-made lentiviral particles expressing SV40 large T-antigen under EF1a promoter, containing Neomycin marker, provided in PBS solution.

CMV Control lentiviral particles (Neo) in PBS
CMV-Null-Neo-PBS	GenTarget	1 x108 IFU/ml x 200ul	EUR 852
Description: Negative control lentivirus contains a null spacer insert under CMV promoter, serves as the negative control of lentivurs treatment for the specificity of any target expression effects. It also has the Neomycin marker under RSV promoter. The virus was concentrated and provided in PBS solution.

EF1a Control lentiviral particles (Neo) in PBS
EF1a-Null-Neo-PBS	GenTarget	1 x108 IFU/ml x 200ul	EUR 852
Description: Negative control lentivirus contains a null spacer insert under EF1a promoter, serves as the negative control of lentivurs treatment for the specificity of any target expression effects. It also has the Neomycin marker under RSV promoter. The virus was concentrated and provided in PBS solution.

TB-16&TB-38 & ESAT
E61H01303	EnoGene	100ug	EUR 411.6

TB Dry
A2536-1000000	ApexBio	1 kg	EUR 351.6
Description: TB Dry is a single component high nutrient medium formulatedto maximize yields of recombinant plasmids and cosmids.The most important advantage of TB DRY is that all componentsare combined into a single powder, eliminating the need to autoclave two separate solutions.