Arviointiprotokolla
Jokainen kolmesta testistä tehdään kunkin valmistajan
ohjeiden mukaisesti seuraavien määrittämiseksi.
1. Herkkyys M. tuberculosis -havaitsemiseksi MGIT-viljelmillä
a. Kukin paikka ympää 25 erilaista MTB-potilaskantaa MGIT-putkiin ja
lataa BACTEC MGIT 960 -laitteeseen
b. Kukin paikka testaa positiiviset viljelmät käyttämällä kolmea määritystä ensimmäisenä päivänä, jolloin
viljelmät signaalivat positiivisena
c. Lue ja kirjaa testitulokset tarkkaan ajankohtaan, joka on suositeltavaa kussakin testipakkauslehdessä
(15 min), ja lukea uudelleen 30 minuutin ja 60 minuutin kohdalla (päivä 1 ja päivä 3
klo 15, 30 ja 60 min)
d. Tallenna kaistan voimakkuus sekä testi- että kontrollilinjoille (”negatiivinen” (-),
“Erittäin heikko” (+/-), “heikko” (+), “keskitaso” (++) ja “vahva” (+++).
e. Viljelmiä, joiden testitulos on negatiivinen, inkuboidaan uudelleen 36 ° C: n inkubaattorissa
vielä 48 tuntia ennen uudelleen testausta

2. Herkkyys M. tuberculosis -havaitsemiseksi LJ-viljelmillä
a. Kukin paikka inokuloi 20 erilaista potilaskantaa MTB-kantoja LJ-alustalle
ja inkuboi 36 ° C: ssa näkyvien pesäkkeiden ilmestymiseen saakka.
b. Valmista jokaisen kannan suspensio, joka vastaa MacFarlandin sameusstandardia
1.0, kuhunkin testipakkaukseen sisältyvään puskuriin.
c. Valmista jokaisen 1,0 MacFarland-standardisuspension laimennos
määrityspuskurissa arvoon 1:10 ja 1: 100.
d. Testaa jokaisen MTB-kannassuspension kaikki kolme laimennosta käyttämällä kutakin
kolmea immunomääritystä
e. Lue ja kirjaa testitulokset tarkkaan ajankohtaan, joka on suositeltavaa kussakin testipakkauslehdessä
(15 min), ja lukea uudelleen 30 minuutin ja 60 minuutin kohdalla (jokaisella laimennuksella
1,0, 1/10 ja 1/100)
f. Tallenna kaistan voimakkuus sekä testi- että vertailulinjoille (”negatiivinen” (-),
“hyvin heikko” (+/-), “heikko” (+), “keskitaso” (++) ja “vahva” (+) ++).
Huomautus: BD pakkausseloste ei kuvata käyttöä kiinteästä viljelmistä, mutta BD
aikaan puskuriin (0,01 M KH2PO4, 0,15 M NaCI, 0,09% natriumatsidia, 0,1%
Tween 80: tä, pH 7,3 NaOH: lla) ja tätä tarkoitusta varten.

3. Määritysten spesifisyys M. tuberkuloosin tunnistamiseksi
a. Jokainen alue ympää 5 erilaista nonuberculosis-mykobakteerikantaa
(mukaan lukien sekä hitaasti kasvavat että nopeasti kasvavat mykobakteerit, kuten M.
fortuitum, M. gastri, M. intracellulare, M. chelonae ja M. simiae)
MGIT-putkiin ja ladataan BACTEC MGIT -laitteeseen. 960
b. Kukin paikka testaa positiiviset viljelmät käyttämällä kolmea määritystä ensimmäisenä päivänä, jolloin
viljelmät signaalivat positiivisena
c. Lue ja kirjaa testitulokset tarkkaan ajankohtaan, joka on suositeltavaa kussakin testipakkauslehdessä
(15 min), ja lukea uudelleen 30 minuutin ja 60 minuutin kohdalla (päivä 1 ja päivä 3 klo
15, 30 ja 60 min)
d. Tallenna kaistan voimakkuus sekä testi- että kontrollilinjoille (”negatiivinen” (-),
“Erittäin heikko” (+/-), “heikko” (+), “keskitaso” (++) ja “vahva” (+++).
e. Viljelmiä, joiden testitulos on negatiivinen, inkuboidaan uudelleen 36 ° C: n inkubaattorissa
vielä 48 tuntia ennen uudelleen testausta

Tulokset
1. Herkkyys MGIT: ssä: Kaikissa 4 tutkimuskohteessa M. tuberculosis havaittiin MGIT: ssä kaikissa 3 määrityksessä samana päivänä (päivä 1) MGIT 960 -automaattisella
instrumentilla, vaikka kaistan intensiteetti ei ollut samanlainen (hyvin heikko vahvaan Ugandalle ja heikosta vahvaan muille 3 SRL: lle

2. Herkkyys LJ: ssä: Kaikissa 4 tutkimuskohdassa kaikki 3 määritystä havaitsivat M. tuberculosis LJ-pesäkkeistä. SRL: t eivät ilmoittaneet negatiivista (-) tulosta käyttämällä laimeaa laimennusta kaikissa 3 testissä paitsi Ugandassa, jossa 1/21 BD MGIT ™ TBc ja Capilia TB Neo -testit olivat negatiivisia (-) 15 min ja 15-30 min vastaavasti. siisti laimennus. Vahva (+++) tulosluku vaihtelee ja raportoitiin kaikissa kolmessa testissä lukuun ottamatta Ugandaa, jossa tulokset raportoitiin negatiivisista (-) – keskisuuriin (++) kaikissa 3 testissä.

Päätelmät:
• Kaikki kolme testiä osoittivat 100% herkkyyden M-tuberkuloosin havaitsemiseksi
MGIT: stä positiivisuuspäivänä.

• Kahden kiinteässä viljelmässä käytettäväksi osoitetun testin (Capilia TB NEO
ja SD TB Ag MPT64 -pikatesti) herkkyys oli 100% M. tuberculosis -bakteerin havaitsemiseksi
LJ-viljelmillä kasvatetuista isolaateista, kun ne suoritettiin pakkausselosteiden mukaisesti. BD MGIT TBc -tunnistustestiä ei ole tarkoitettu käytettäväksi kiinteiden väliaineiden viljelmissä, ja sen herkkyys oli heikentynyt testattaessa LJ-kantoja tässä tutkimuksessa käytetyllä menettelyllä.

• Capilia TB Neo ja BD MGIT ID -testi eivät antaneet vääriä positiivisia tuloksia
minkään testatun NTM: n kanssa (spesifisyys 100%). SD Bioline TB Ag MPT64 antoi heikot vääriä positiivisia tuloksia 2 M. gastri -kannan kanssa yhdessä neljästä tutkimuskohteesta.

• Testien toiminnalliset ominaisuudet olivat samanlaiset. Teknologit pitivät
Capilia TB Neo -määritystä helpommin luettavana johtuen testikaistan vahvemmasta kaistan voimakkuudesta
verrattuna kahteen muuhun määritykseen. SD TB Ag MPT64 -pikatesti osoitti taustatekijöitä, jotka estävät testin tulkintaa, jos se luetaan 30 minuutin jälkeen, vaikka valmistajan ohjeet sallivat sen. BD MGIT ID -testiä ei ole valmistettu käytettäväksi kiinteiden viljelmien isolaattien kanssa.

Yhteenvetona voidaan todeta, että nyt on olemassa kolme kaupallisesti tuotettua pikatestiä, jotka mahdollistavat
M. tuberculosisin erittäin herkän tunnistamisen positiivisista MGIT-viljelmistä. Kaksi näistä valmistetaan myös käytettäväksi kiinteiden viljelmien isolaattien kanssa ja niiden suorituskyky on hyvä .

Kaikki kolme määritystä osoittavat hyväksyttävän yleisen herkkyyden, spesifisyyden ja
helppokäyttöisyys. SD-määritys osoitti enemmän taustavärejä pitkittyneillä
lukuaikoilla, ja se voi reagoida ristireaktiossa M. gastrin kanssa, ja BD MGIT ID -testi osoitti jonkin verran heikompia testikaistoja, jolloin tulokset olivat vähemmän ilmeisiä.

EF1a-TetR (Neo) Lentiviral particles
LVP459-Neo	GenTarget	1x107 IFU/ml x 200ul	EUR 484.8
Description: Pre-made lentiviral particles expressing tetracycline regulator protein (TetR) under enhanced EF1a promoter with Neomycin antibioic marker.

LoxP GFP/RFP ColorSwitch (Neo) lentivirus
LVP460-Neo	GenTarget	1x107 IFU/ml x 200ul	EUR 852
Description: Pre-made lentiviral particles expressing "LoxP-GFP-stop-LoxP-RFP-Stop" cassette under suCMV promoter. It also contains a Neomycin antibiotic selection marker under Rsv promoter. Virus is provided in DMEM medium with 10% FBS and 60ug/ml of polybrene.

pWZL-Neo Retroviral Vector
RTV-001-NEO	Cell Biolabs	10 ?g	EUR 679.2
Description: Use this construct to clone your gene for downstream recombinant retroviral packaging

SV40 large T-antigen (Neo), CMV lentiviral particles
LVP016-Neo	GenTarget	1x107 IFU/ml x 200ul	EUR 418.8
Description: Pre-made lentiviral particles expressing SV40 large T-antigen under suCMV promoter, containing Neomycin marker.

SV40 large T-antigen (Neo), EF1a lentiviral particles
LVP557-Neo	GenTarget	1x107 IFU/ml x 200ul	EUR 418.8
Description: Pre-made lentiviral particles expressing SV40 large T-antigen under EF1a promoter, containing Neomycin marker.

CMV Control lentiviral particles (Neo)
CMV-Null-Neo	GenTarget	1 x107 IFU/ml x 200ul	EUR 418.8
Description: Negative control lentivirus contains a null spacer insert under CMV promoter, serves as the negative control of lentivurs treatment for the specificity of any target expression effects. It also has the Neomycin marker under RSV promoter.

EF1a Control lentiviral particles (Neo)
EF1a-Null-Neo	GenTarget	1 x107 IFU/ml x 200ul	EUR 418.8
Description: Negative control lentivirus contains a null spacer insert under EF1a promoter, serves as the negative control of lentivurs treatment for the specificity of any target expression effects. It also has the Neomycin marker under RSV promoter.

hTERT (CMV, Neo) lentivirus in PBS
LVP1130-Neo-PBS	GenTarget	1x108 IFU/ml x 200ul	EUR 852
Description: Concentrated lentivirus in PBS, expressing human TERT gene under suCMV promoter, containing Neomycin marker.

hTERT (EF1a, Neo) lentivirus in PBS
LVP1131-Neo-PBS	GenTarget	1x108 IFU/ml x 200ul	EUR 852
Description: Concentrated lentivirus in PBS, expressing human TERT gene under EF1a promoter, containing Neomycin marker.

rtTA (Neo) in PBS, Lentiviral particles
LVP400-Neo-PBS	GenTarget	5x107 IFU/ml x 200ul	EUR 608.4
Description: Pre-made lentiviral particles expressing reverse tetracycline Transcriptional Activator (rtTA) under enhanced EF1a promoter with Neomycin antibioic marker, concentrated particles provided in PBS solution.

Color Switch, CRE report cell line: HEK293-loxP-GFP-RFP Neo)
SC018-Neo	GenTarget	2x10E6 cell/ml x1ml	EUR 5280
Description: CRE reporter cell line (Neo): HEK293 cell line expressing "LoxP-GFP-stop-LoxP-RFP" cassette with Neomycin antibiotic marker

CMV-TetR (Neo) Lentiviral particles  in PBS
LVP017-Neo-PBS	GenTarget	5x107 IFU/ml x 200ul	EUR 608.4
Description: Pre-made lentiviral particles expressing tetracycline regulator protein (TetR) under CMV promoter, with Neomycin antibiotic marker. Particles pellet was re-suspended in PBS solution.

EF1a-TetR (Neo) Lentiviral particles  in PBS
LVP459-Neo-PBS	GenTarget	5x107 IFU/ml x 200ul	EUR 608.4
Description: Pre-made lentiviral particles expressing tetracycline regulator protein (TetR) under enhanced EF1a promoter with Neomycin antibioic marker. Particles was pellet down and re-suspended in PBS solution.

LoxP GFP/RFP ColorSwitch (Neo) lentivirus (concentrated)
LVP460-Neo-PBS	GenTarget	5x107 IFU/ml x 200ul	EUR 1034.4
Description: Pre-made lentiviral particles expressing "LoxP-GFP-stop-LoxP-RFP-Stop" cassette under suCMV promoter. It also contains a Neomycin antibiotic selection marker under Rsv promoter. Virus was provied in PBS solution.

TB-16&TB-38
E61H01302	EnoGene	100ug	EUR 411.6

SV40 large T-antigen (Neo) in PBS, CMV lentiviral particles
LVP016-Neo-PBS	GenTarget	5x107 IFU/ml x 200ul	EUR 852
Description: Pre-made lentiviral particles expressing SV40 large T-antigen under suCMV promoter, containing Neomycin marker, provided in PBS solution.

SV40 large T-antigen (Neo) in PBS, EF1a lentiviral particles
LVP557-Neo-PBS	GenTarget	5x107 IFU/ml x 200ul	EUR 852
Description: Pre-made lentiviral particles expressing SV40 large T-antigen under EF1a promoter, containing Neomycin marker, provided in PBS solution.

CMV Control lentiviral particles (Neo) in PBS
CMV-Null-Neo-PBS	GenTarget	1 x108 IFU/ml x 200ul	EUR 852
Description: Negative control lentivirus contains a null spacer insert under CMV promoter, serves as the negative control of lentivurs treatment for the specificity of any target expression effects. It also has the Neomycin marker under RSV promoter. The virus was concentrated and provided in PBS solution.

EF1a Control lentiviral particles (Neo) in PBS
EF1a-Null-Neo-PBS	GenTarget	1 x108 IFU/ml x 200ul	EUR 852
Description: Negative control lentivirus contains a null spacer insert under EF1a promoter, serves as the negative control of lentivurs treatment for the specificity of any target expression effects. It also has the Neomycin marker under RSV promoter. The virus was concentrated and provided in PBS solution.

TB-16&TB-38 & ESAT
E61H01303	EnoGene	100ug	EUR 411.6

TB Dry
A2536-1000000	ApexBio	1 kg	EUR 351.6
Description: TB Dry is a single component high nutrient medium formulatedto maximize yields of recombinant plasmids and cosmids.The most important advantage of TB DRY is that all componentsare combined into a single powder, eliminating the need to autoclave two separate solutions.

TB Dry
A2536-5000000	ApexBio	5 kg	EUR 1432.8
Description: TB Dry is a single component high nutrient medium formulatedto maximize yields of recombinant plasmids and cosmids.The most important advantage of TB DRY is that all componentsare combined into a single powder, eliminating the need to autoclave two separate solutions.

TB 21007
B7214-10	ApexBio	10 mg	EUR 388.8

TB 21007
B7214-50	ApexBio	50 mg	EUR 1453.2

pEBB-TB
PVT17895	Lifescience Market	2 ug	EUR 360

TB ESAT antigen
E61H01301	EnoGene	100ug	EUR 458.4

TB CFP10 Antigen
E61H01304	EnoGene	100ug	EUR 411.6