Johdanto
Alla kuvattua coomassie-värjäysprotokollaa suositellaan Invitrogen Novex -geelien värjäykseen. Voit käyttää mitä tahansa valitsemaasi Coomassie-värjäysprotokollaa.
Tarvittavat materiaalit
Käyttäjän toimittamat materiaalit:
Tarvitset seuraavat tarvikkeet Coomassie Blue Stainingille.
- Invitrogen SimplyBlue SafeStain
- Kolloidinen sininen värjäyssarja
- Värjäysastia
- Deionisoitu vesi
- Orbital Shaker
- 0,1% Coomassie R-250 40% etanolissa ja 10% etikkahapossa (jos käytetään Invitrogen Coomassie R-250 -värjäystä)
- Säilytysliuos, joka sisältää 10% etanolia ja 7,5% etikkahappoa (jos käytetään Invitrogen Coomassie R-250 -värjäystä)
- Metanoli
Tilaustiedot
Catalog #NameSizePrice (INR) Määrä
| LC6065 | SimplyBlue SafeStain | 3,5 litraa | 36,027.00 | ||
SimplyBlue SafeStain -protokolla
Yleiskäyttöön 1,0 mm: n ja 1,5 mm: n Tris-glysiinigeelien, 1,0 mm: n trisiini-, Zymogram- ja IEF-minigeelien (8 x 8 cm) kanssa.
Seuraa elektroforeesin jälkeen alla olevia ohjeita. Varmista, että minigeeli liikkuu vapaasti vedessä tai tahrassa diffuusion helpottamiseksi kaikissa vaiheissa.
Huuhtele minigeeliä 3 kertaa 5 minuutin ajan 100 ml: lla deionisoitua vettä SDS: n ja puskurisuolojen poistamiseksi, jotka häiritsevät väriaineen sitoutumista proteiiniin. Hävitä kukin huuhtelu.
Värjää minigeeli riittävällä määrällä Invitrogen ™ SimplyBlue ™ SafeStain (20-100 ml) geelin peittämiseksi. Tahraa 1 tunti huoneenlämmössä ravistellen kevyesti. Yhtyeet alkavat kehittyä muutamassa minuutissa. Inkubaation jälkeen hävitä tahra. Tahraa ei voida käyttää uudelleen. Huomaa: Geeliä voidaan värjätä jopa 3 tuntia, mutta 3 tunnin kuluttua herkkyys vähenee. Jos sinun on jätettävä geeli yön yli tahraan, lisää 2 ml 20-prosenttista NaCl (w / v) veteen jokaista 20 ml tahraa kohti. Tämä menettely ei vaikuta herkkyyteen.
Pese minigeeli 100 ml: lla vettä 1-3 tuntia. Geeli voidaan jättää veteen useita päiviä ilman herkkyyden menetystä. Vedessä on pieni määrä väriainetta, joka on tasapainossa proteiiniin sitoutuneen väriaineen kanssa, joten proteiinit pysyvät sinisinä.
Saadaksesi kirkkaimman taustan valokuvaukselle, suorita toinen tunnin pesu 100 ml: lla vettä. Huomaa: Herkkyys vähenee nyt, jos geelin annetaan pysyä vedessä yli yhden päivän ajan. Vapaan väriaineen pelkistyminen vedessä suosii värin irtoamista proteiinista. Jos sinun on säilytettävä geeliä muutaman päivän ajan, lisää 20 ml 20% NaCl: a.
Kolloidinen sininen värjäyssarjaprotokolla
Valmista värjäysliuos yksittäiselle geelille alla olevassa taulukossa kuvatulla tavalla. Kahden geelin kohdalla kaksinkertainen määrä värjäykseen käytettyjä reagensseja. Ravista Stainer B: tä ennen liuoksen tekemistä.
| Ratkaisut | Tris-glysiini, trisiini |
| Deionisoitu vesi | 55 ml |
| Metanoli | 20 ml |
| Tahra B | 5 ml |
| Tahra A | 20 ml |
Inkuboi geeli tässä värjäysliuoksessa seuraavasti huoneenlämpötilassa ravistellen varovasti:
-
-
- Tris-glysiini-, trisiini- ja Zymogram-geelit vähintään 3 tuntia ja enintään 12 tuntia.
- IEF-geelit 30 minuutin ajan.
-
Dekantoidaan värjäysliuos ja lisätään värjäysastiaan vähintään 200 ml deionisoitua vettä geeliä kohti. Ravista geeliä varovasti vedessä vähintään 7 tuntia. Geelillä on selkeä tausta 7 tunnin kuluttua vedessä.
Huomaa: Novex-geelit voidaan jättää deionisoituun veteen enintään 3 päiväksi ilman merkittäviä muutoksia kaistan voimakkuudessa ja taustan kirkkaudessa.
Pitkäaikaista varastointia varten (yli 3 päivää) pidä geeli 20% ammoniumsulfaattiliuoksessa 4 ° C: ssa.
Coomassie R-250 -värjäysprotokolla
- Valmista värjäysliuos, joka sisältää 0,1% Coomassie R-250: tä 40% etanolissa, 10% etikkahapossa.
- Elektroforeesin jälkeen inkuboi 1 tai 2 geeliä värjäysastiassa, joka sisältää 100 ml Coomassie Blue R-250 -värjäysliuosta. Varoitus: Ole varovainen, kun teet seuraavia vaiheita mikroaaltouunilla. Älä ylikuumenta värjäysliuoksia.
- Peitä värjäysastia löysästi ja kuumenna mikroaaltouunissa täydellä teholla 1 minuutin ajan. Älä anna liuoksen kiehua, jotta vaaralliset, syttyvät höyryt eivät muodostuisi.
- Poista värjäysastia mikroaaltouunista ja ravista geeliä varovasti 15 minuuttia huoneenlämmössä kiertoravistimessa.
- Dekantoi tahra ja huuhtele geeli kerran deionisoidulla vedellä.
- Valmista destainiliuos, joka sisältää 10% etanolia ja 7,5% etikkahappoa.
- Aseta yksi tai kaksi värjättyä geeliä värjäysastiaan, joka sisältää 100 ml destainiliuosta.
- Peitä värjäysastia löysästi ja kuumenna mikroaaltouunissa täydellä teholla 1 minuutin ajan.
- Ravista geeliä varovasti huoneenlämmössä kiertoravistimessa, kunnes haluttu tausta saavutetaan.
Coomassie Blue Protein Staining Solution |
|||
| abx299720-100g | Abbexa | 100 µg | Ask for price |
Coomassie Blue Protein Staining Solution |
|||
| abx299720-20g | Abbexa | 20 µg | EUR 262.5 |
Coomassie Blue Protein Staining Solution |
|||
| abx299720-50g | Abbexa | 50 µg | Ask for price |
Fast Coomassie Blue Staining Solution (10×) |
|||
| E-IR-R129-100mL | Elabscience Biotech | 100mL | EUR 35 |
Fast Coomassie Blue Staining Solution (10×) |
|||
| E-IR-R129-200mL | Elabscience Biotech | 200mL | EUR 50 |
Fast Coomassie Blue Staining Solution (10×) |
|||
| E-IR-R129-each | Elabscience Biotech | each | Ask for price |
Coomassie Blue G-250 Staining Solution |
|||
| GR103035 | Genorise Scientific | 1 L | EUR 95 |
Fast Coomassie Blue Protein Staining Solution |
|||
| abx098912-100l | Abbexa | 100 µl | Ask for price |
Fast Coomassie Blue Protein Staining Solution |
|||
| abx098912-1ml | Abbexa | 1 ml | Ask for price |
Fast Coomassie Blue Protein Staining Solution |
|||
| abx098912-200l | Abbexa | 200 µl | Ask for price |
Coomassie Blue Staining Destaining Solution |
|||
| AR0140 | BosterBio | 1kit (for 10 assays to stain gels of 5 x 8.5cm) | EUR 84 |
Coomassie Brilliant Blue Fast Staining Solution |
|||
| abx090652-200ml | Abbexa | 200 ml | EUR 243.6 |
Coomassie Brilliant Blue Fast Staining Solution |
|||
| abx090652-100l | Abbexa | 100 µl | EUR 137.5 |
Coomassie Brilliant Blue Fast Staining Solution |
|||
| abx090652-1ml | Abbexa | 1 ml | Ask for price |
Coomassie Brilliant Blue Fast Staining Solution |
|||
| abx090652-200l | Abbexa | 200 µl | Ask for price |
Coomassie Brilliant Blue Fast Staining Solution |
|||
| MBS355549-200mL | MyBiosource | 200mL | EUR 185 |
Coomassie Brilliant Blue Fast Staining Solution |
|||
| MBS355549-5x200mL | MyBiosource | 5x200mL | EUR 530 |
5X Coomassie Brilliant Blue Protein Staining Solution |
|||
| abx460032-1096tests | Abbexa | 10 × 96 tests | Ask for price |
5X Coomassie Brilliant Blue Protein Staining Solution |
|||
| abx460032-596tests | Abbexa | 5 × 96 tests | Ask for price |
5X Coomassie Brilliant Blue Protein Staining Solution |
|||
| abx460032-96tests | Abbexa | 96 tests | EUR 525 |
Brilliant Blue R Staining Solution (Coomassie Brilliant Blue R-250 solution) |
|||
| 84778 | Sisco Laboratories | 100 ml | EUR 23.55 |
|
Description: Part B |
|||
Coomassie Blue Fast Staining and No-decoloring Solution |
|||
| EZWB19-500mL | Shanghai WSHT Biotechnology | 500mL | EUR 31.2 |
SuperKine™ Protein Gel Fast Staining Solution (Coomassie Blue) |
|||
| BMU105-EN-250mL2 | Abbkine | 250 mL×2 | EUR 59 |
|
Description: Protein Gel Staining |
|||
SuperKine™ Protein Gel Fast Staining Solution (Coomassie Blue) |
|||
| BMU105-EN-each | Abbkine | each | Ask for price |