Thermo Scientific Proteinase K on laaja-alainen endolyyttinen proteaasi, jota käytetään laajasti proteiinien pilkkomiseen nukleiinihappovalmisteissa. Se hajottaa proteiineja jopa pesuaineiden läsnä ollessa. Proteinaasi K katkaisee peptidisidokset alifaattisten, aromaattisten tai hydrofobisten aminohappojen karboksyylipuolilla. Proteinaasi K on luokiteltu seriiniproteaasiksi. Pienin tällä entsyymillä hydrolysoituva peptidi on tetrapeptidi.
Kohokohdat
• Käyttövalmis liuos • Aktiivinen monenlaisissa reaktio-olosuhteissa
Sovellukset
• Genomisen DNA: n eristäminen hiiren hännästä • Genomisen DNA: n eristäminen viljellyistä soluista • DNaasien ja RNaasien poisto eristettäessä DNA: ta ja RNA: ta kudoksista tai solulinjoista • Entsyymipaikan määrittäminen • PCR-tuotteiden kloonaustehokkuuden parantaminen
Fungus-Derived Proteinase K Purified Recombinant
Huomautus
• Proteinaasi K: n suositeltu työskentelypitoisuus on 0,05–1 mg / ml. Aktiivisuus entsyymin stimuloidaan 0,2-1% SDS tai 1-4 M urea • Ca2 + suojaa proteinaasi K vastaan autolyysin, lisää lämpöstabiilisuus, ja on säätelemään substraattia sitovaan proteinaasi K • Vakaa yli laaja pH-alue: 4,0–12,5 , optimaalinen pH 7,5–8,0 • Optimaalinen aktiivisuus 50–55 ° C: ssa • Entsyymin nopea denaturoituminen tapahtuu yli 65 ° C: n lämpötiloissa
Sienestä johdettu proteinaasi K: n puhdistettu rekombinantti innovatiivisesta tutkimuksesta valmistetaan pitoisuudella 20 mg / ml 10 mM Tris-HCl: ssä, 1 mM kalsiumasetaatissa, pH 7,5, joka sisältää 50% glyserolia. Tämä on neste, jonka pitoisuus on 400 yksikköä / ml.
Tämä tuote on käyttökelpoinen aikaansaamalla peptidisidosten katkaisu ja kykenee katalysoimaan peptidiamidin hydrolyysiä. Sen on testattu olevan vapaa DNaasista ja RNaasista. Tiivistetty ja käyttövalmis neste.
Innovatiivisessa tutkimuksessa tarjoamme luotettavia, yhtenäisiä tuotteita, jotka tuottavat luotettavia, yhtenäisiä tuloksia.
Käyttökohteet Endogeenisten nukleaasien poisto DNA: n ja RNA: n valmistuksen aikana; kudosleikkeiden valmistelu in situ -hybridisaatiota varten.
Suorituskyvyn ja laadun testaus Endodeoksiribonukleaasi- ja eksodeoksiribonukleaasimääritykset; nestemäinen muoto testattu RNaasiaktiivisuuden puuttumisen varalta.
Yksikkömääritys Yksi mAnson-yksikkö kuvataan entsyymimääräksi, joka vapauttaa 1 umoolia Folin-positiivista aminohappoa minuutin kuluessa 37 ° C: ssa käyttäen hemoglobiinia substraattina.
Ominaisuudet ja Edut
Proteinaasi K katkaisee proteiinit aminohappojen X ja Y (X- ↓ -Y) välillä, kun X = alifaattinen, aromaattinen tai hydrofobinen aminohappo ja Y = mikä tahansa aminohappo. Entsyymi on erittäin tehokas natiiviproteiineissa, ja sitä voidaan siksi käyttää inaktivoimaan endogeeniset nukleaasit, kuten RNaasit ja DNaasit.
Proteinase K, recombinant
Valitse tehokas työkalu mallin valmisteluun. Inaktivoi useimpien lajien DNaasit ja RNaasit.
Luota jatkuvaan laatuun ja suorituskykyyn. Tiukka laatutestaus takaa optimaalisen vakauden ja korkean tason erästä erään-suorituskyvyn.
Valmistele näytteet monenlaisissa olosuhteissa. Vankka entsyymi on stabiili laajalla pH-alueella ja sopii erinomaisesti erilaisiin sovelluksiin.
Hyödynnä saasteettomasta entsyymistä. Entsyymi testataan RNaasien ja DNaasien puuttumisen suhteen, ja se on käytännöllisesti katsoen vapaa DNA: sta. Se soveltuu erityisesti PCR-mallien eristämiseen.
Laatu
Tämä valmiste ei sisällä RNaaseja, DNaaseja ja DNA: ta nykyisten laadunvalvontamenetelmien mukaisesti. Nukleaasien puuttuminen: Jokainen erä testataan erilaisilla substraateilla endonukleaasin, eksonukleaasin, ribonukleaasin ja nikkelöivän aktiivisuuden puuttumisen varmistamiseksi. DNA-pitoisuus: ≤10 pg / mg entsyymiä (määritetään kynnysarvon mukaan) Biopurden: ≤5 cfu / g (määritetään Euroopan farmakopean tiukimmalla testillä, joka tunnistaa elinkelpoisten aerobisten bakteerien, hiivan ja sienien kokonaismäärän)
Yksikön määritelmä
Tilavuusaktiivisuus: noin 50 U / ml liuosta (kromotsyymimääritys); noin 600 U / ml liuosta (hemoglobiinimääritys). Yksi yksikkö on entsyymiaktiivisuus, joka pilkkoutuu +25 ° C: ssa 1 minuutissa 18 mmol Chromozym TRY: tä (vastaa 600 U / ml hemoglobiinimäärityksellä). Katso tämän erän tarkat arvot Analyysitodistuksesta.
Valmisteluhuomautus
Aktivaattori: Proteinaasi K -aktiivisuuden stimuloimiseksi voidaan lisätä denaturointiaineita (SDS ja urea). Esimerkiksi SDS 2%: n loppupitoisuudella voi lisätä proteinaasi K: n aktiivisuutta merkittävästi. Optimointi denaturoivilla aineilla voi lisätä proteinaasiaktiivisuutta jopa seitsenkertaisesti.
Työskentelyliuos: Ehdotetut puskurit: Sopivin proteinaasi K -puskuri vaihtelee sovelluksesta toiseen. Noudata aina annettujen parametrien pH- ja lämpötilaohjeita. Yleensä proteinaasi K on stabiili ja erittäin aktiivinen puskurissa, joka sisältää denaturointireagensseja, kuten ureaa, natriumdodekyylisulfaattia (SDS) ja guanidiinisuoloja.
Estäjät: Entsyymi inaktivoidaan Pefabloc ® SC. Sitä ei kuitenkaan inaktivoi metalli-ionit, kelaatinmuodostajat (esim. EDTA), sulfhydryylireagenssit tai trypsiini- ja kymotrypsiini-inhibiittorit.
Muut huomautukset
RNaasien ja DNaasien nopeaan inaktivointiin. Entsyymi voi pelkistää proteiinin vapaiksi aminohapoiksi, jos sitä on suurina ylimäärinä pitkiä inkubointijaksoja.
Vain biotieteelliseen tutkimukseen. Ei käytettäväksi diagnostisissa toimenpiteissä.
