Kuvaus

Thermo Scientific Proteinase K on laaja-alainen endolyyttinen proteaasi, jota käytetään laajasti proteiinien pilkkomiseen nukleiinihappovalmisteissa. Se hajottaa proteiineja jopa pesuaineiden läsnä ollessa. Proteinaasi K katkaisee peptidisidokset alifaattisten, aromaattisten tai hydrofobisten aminohappojen karboksyylipuolilla. Proteinaasi K on luokiteltu seriiniproteaasiksi. Pienin tällä entsyymillä hydrolysoituva peptidi on tetrapeptidi.

Kohokohdat

• Käyttövalmis liuos
• Aktiivinen monenlaisissa reaktio-olosuhteissa

Sovellukset

• Genomisen DNA: n
eristäminen hiiren hännästä • Genomisen DNA: n eristäminen viljellyistä soluista
• DNaasien ja RNaasien poisto eristettäessä DNA: ta ja RNA: ta kudoksista tai solulinjoista
• Entsyymipaikan määrittäminen
• PCR-tuotteiden kloonaustehokkuuden parantaminen

Huomautus

• Proteinaasi K: n suositeltu työskentelypitoisuus on 0,05–1 mg / ml. Aktiivisuus entsyymin stimuloidaan 0,2-1% SDS tai 1-4 M urea
• Ca2 + suojaa proteinaasi K vastaan autolyysin, lisää lämpöstabiilisuus, ja on säätelemään substraattia sitova kohta proteinaasi K
• Vakaa yli laaja pH-alue:
4,0-12,5 , optimaalinen pH 7,5-8,0 • Optimaalinen aktiivisuus 50-55 ° C: ssa
• Entsyymin nopea denaturoituminen tapahtuu yli 65 ° C lämpötiloissa

Kuvaus

Proteinaasi K on erittäin reaktiivinen seriiniproteaasi, jolla on kyky sulattaa natiivia proteiineja, inaktivoida siten entsyymit, kuten DNaasi ja RNaasi, turvautumatta denaturointiprosessiin. Se on tehokkain proteinaasi kaikkien tähän mennessä karakterisoitujen proteinaasien joukossa. Se pilkkoutuu peptidisidokseen alifaattisten, aromaattisten tai hydrofobisten aminohappojen karboksyylihapporyhmän viereen.

Rekombinanttia proteinaasia K käytetään suurien molekyylipainojen nukleiinihappojen eristämiseen tai valmistamiseen. Se on erittäin puhdasta ja sillä on korkeampi spesifinen aktiivisuus ja se on vakaampi huoneenlämmössä verrattuna alkuperäiseen proteinaasi K: hon.

Rekombinantti proteinaasi K: ta ilmentyy hiivasta  Pichia pastoriksesta Engyodontium-albumia (Tritirachium album) endosyyttistä proteaasia koodaavalla kloonatulla geenillä  .

 

Sovellukset

• Rekombinantti proteinaasi K on erittäin tehokas natiivissa proteiineissa, ja sitä voidaan siksi käyttää inaktivoimaan endogeeniset nukleaasit, kuten RNaasit ja DNaasit. Tämä ominaisuus tekee proteinaasi K: sta erityisen sopivan natiivin RNA: n ja DNA: n eristämiseen kudoksista tai solulinjoista.
• Käytetään kalvorakenteiden analysointiin modifioimalla proteiineja ja glykoproteiineja solupinnoilla.
• Sopii erityisen hyvin nukleiinihappojen eristämiseen amplifikaatioreaktioita varten.
• Edistää solujen hajoamista aktivoimalla bakteerien autolyyttisen tekijän.
• Käytetään solujätteiden poistamiseen pesäkkeitä valmisteltaessa ja kudososien käsittelyyn koettimen tehokkaan tunkeutumisen varmistamiseksi in situ -hybridisaation aikana.

 

Käyttövalmiiksi saattamista koskevat suositukset

Varastoon liuos valmistamiseksi, suosittelemme liuottamalla lyofilisoitu jauhe puskurissa (20 mM Tris, 1 mM CaCI ₂ , 2% glyseroli, pH 7,4).

Kalsium on tärkeä proteinaasi K: n termostabiilisuudelle ja pH-arvo on kriittinen korkealle liukoisuudelle.

Kylmäsuojaaineen glyserolin käyttö lopulliseen 50%: n pitoisuuteen kantaliuoksessa on estää jäätymis- / sulamisvauriot. Proteinaasi K: lla säilyi 99% aktiivisuudesta 12 pakastus- / sulatussyklin jälkeen varastoliuoksessa. Vältä toistuvaa jäätymistä ja sulatusta proteiinin saostumisen estämiseksi, jos glyserolia ei lisätä.

Proteinaasi K -liuos pysyy aktiivisena laajalla pH-alueella (4,0-12,5, käytetään usein välillä 7,5-9,0) ja laajalla lämpötila-alueella 25-75 ° C. Liuos pysyy steriilinä ja stabiilina vähintään 12 kuukauden ajan 4 ° C: ssa.

 

Recombinant purified Red Fluorescent Proteins (RFP/dsRed) protein control for Western blot
RFP12-C	Alpha Diagnostics	100 ul	EUR 343.2

Recombinant (E. coli) Red Fluorescent Proteins (RFP/dsRed) protein for ELISA or Standards (>98%)
RFP15-R	Alpha Diagnostics	25 ug	EUR 300

Flagellin protien (S. typhimurium), purified (TLR5 ligand), Low endotoxin
FLGN17-N-50	Alpha Diagnostics	50 ug	EUR 489.6

Recombinant Human Microtubule-associated Proteins 1A/1B Light Chain 3B/MAP1LC3B
CG98-10ug	Novoprotein	10ug	EUR 169.2
Description: Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution of 20mM Tris, 150mM NaCl, 2mM DTT, pH8.0.

Recombinant Human Microtubule-associated Proteins 1A/1B Light Chain 3B/MAP1LC3B
CG98-1mg	Novoprotein	1mg	EUR 2252.4
Description: Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution of 20mM Tris, 150mM NaCl, 2mM DTT, pH8.0.

Recombinant Human Microtubule-associated Proteins 1A/1B Light Chain 3B/MAP1LC3B
CG98-500ug	Novoprotein	500ug	EUR 1593.6
Description: Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution of 20mM Tris, 150mM NaCl, 2mM DTT, pH8.0.

Recombinant Human Microtubule-associated Proteins 1A/1B Light Chain 3B/MAP1LC3B
CG98-50ug	Novoprotein	50ug	EUR 363.6
Description: Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution of 20mM Tris, 150mM NaCl, 2mM DTT, pH8.0.

Proteinase K, Recombinant, NGS Grade
9247-100	Biovision	each	EUR 210

Proteinase K, Recombinant, NGS Grade
9247-10G	Biovision	each	EUR 6812.4

Proteinase K, Recombinant, NGS Grade
9247-1G	Biovision	each	EUR 810

Proteinase K, Recombinant, NGS Grade
9247-500	Biovision	each	EUR 614.4

Herv-K Envelope Recombinant Protein
1170-V-01mg	Virogen	0,1 mg	EUR 321
Description: Human Endogenous Retrovirus Envelope antigen 48 kDa

Herv-K Envelope Recombinant Protein
1170-V-1000ug	Virogen	1000 ug	EUR 1539
Description: Human Endogenous Retrovirus Envelope antigen 48 kDa

Recombinant Human K-Cadherin Protein
RP00244	Abclonal	10 μg	EUR 186

Proteinase K, Recombinant, Standard Grade
9250-100	Biovision	each	EUR 124.8

Proteinase K, Recombinant, Standard Grade
9250-10G	Biovision	each	EUR 4627.2

Proteinase K, Recombinant, Standard Grade
9250-1G	Biovision	each	EUR 548.4

Proteinase K, Recombinant, Standard Grade
9250-500	Biovision	each	EUR 314.4

Proteinase K, Recombinant, Standard Grade
9251-100	Biovision	each	EUR 1266

Proteinase K, Recombinant, Standard Grade
9251-25	Biovision	each	EUR 352.8

Proteinase K, Recombinant, Standard Grade
9251-5	Biovision	each	EUR 144

Proteinase K, Recombinant, Molecular Grade
9210-100	Biovision	each	EUR 144

Proteinase K, Recombinant, Molecular Grade
9210-10G	Biovision	each	EUR 3171.6